概述

越来越多的核酸检测（NAD）测试现在被用于诊断各种动物和人类的传染病。最常见的方法是聚合酶链反应（PCR），其中存在许多变异和等温扩增方法（例如环介导的等温扩增）。此外，固相或液相微阵列正在成为基于生物技术的诊断的新工具。这些测定中使用的扩增技术为它们提供了高分析灵敏度。扩增反应的产物可以通过多种方式检测，例如，通过琼脂糖凝胶中的可视化，使用标记的探针（例如TaqMan探针），通过实时检测产物的积累或通过使用阵列进行检测。特异性探针捕获在固体表面基质上或珠子上（Lauerman，2004; Viljoen等人，2005）。可以将不同的PCR测定多路复用在一起以检测一个管中的几个靶，或者将靶向的分析物和对照组合，产生不同的扩增产物，所有这些都在一个反应容器中。虽然这具有明显的优点，但在优化过程中必须非常小心以确保分析性能不受损害。类似地，可以使用一组引物产生多重结果PCR，但采用标记探针，其结合通过PCR检测的不同物种或菌株中的不同靶序列（Wakeley等，2005; 2006）。 NAD扩增技术通常基于以下原理：存在反应中靶向的特定序列的指数扩增。这提供了具有高分析灵敏度和特异性的NAD。由于NAD达到的这种高灵敏度特性，必须采取特殊护理，并且必须采取特殊的预防措施，以防止NAD扩增子污染进行随后的样品分析。这更可能是在实验室中打开反应管以进行进一步处理的问题，例如，运行凝胶或进行嵌套测定。为了避免这种污染，应采用严格的实验室规程，包括单独的房间或柜子，用于检测的特定阶段，实验室服装和手套的变化，以及严格的清洁程序（Viljoen等，2005;动物健康实验室标准小组委员会）。由于这些原因，基于闭管系统的测试通常更适合于诊断测定（Sawyer等人，2006）。与所有测定一样，重要的是使用适当的对照来证明测定按预期进行。用于分析开发的所有样品应具有良好的来源，并且应在质量体系的框架内进行开发，以确保适当水平的培训，设备维护和监测等（Burkhardt，2000）。

参考资料 Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2019